¿qué es la afinidad de unión?
la afinidad de unión es la fuerza de la interacción de unión entre una sola biomolécula (por ejemplo, proteína o ADN) a su ligando/compañero de unión (por ejemplo, fármaco o inhibidor). La afinidad de unión es típicamente medida y reportada por la constante de disociación de equilibrio (KD), que se usa para evaluar y clasificar las fortalezas de las interacciones bimoleculares. Cuanto menor sea el valor de KD, mayor será la afinidad de unión del ligando para su objetivo., Cuanto mayor es el valor de KD, más débilmente la molécula objetivo y el ligando son atraídos y se unen entre sí.
la afinidad de unión está influenciada por interacciones intermoleculares no covalentes, como enlaces de hidrógeno, interacciones electrostáticas, fuerzas hidrofóbicas y de Van der Waals entre las dos moléculas. Además, la afinidad de unión entre un ligando y su molécula diana puede verse afectada por la presencia de otras moléculas.
¿por qué debo medir la afinidad vinculante para mi aplicación?,
siempre que esté caracterizando proteínas, ácidos nucleicos y cualquier biomolécula, comprender la afinidad de unión a sustratos, inhibidores y cofactores es clave para apreciar las interacciones intermoleculares que impulsan los procesos biológicos, la biología estructural y las relaciones estructura-función.
para el descubrimiento de fármacos, la afinidad de unión también se mide en cuanto al orden de clasificación de los impactos de unión al objetivo y ayuda a diseñar fármacos que se unen a sus objetivos de forma selectiva y específica.,
Hay muchas maneras de medir las constantes de afinidad y disociación de unión, como ELISAs, ensayos de gel-shift, ensayos de pull-down, diálisis de equilibrio, ultracentrifugación analítica, resonancia plasmónica superficial y ensayos espectroscópicos.
¿qué soluciones de afinidad vinculante ofrecen Malvern Panalytical?
Malvern Panalytical ofrece calorimetría de titulación isotérmica (ITC), que es una técnica analítica directa y sin etiquetas que mide la afinidad de unión entre dos moléculas cualesquiera que interactúan entre sí, como una proteína y un ligando., ITC mide el cambio de calor asociado con el evento de unión, y se considera el «estándar de oro» del análisis de interacción, ya que permite el estudio de una amplia gama de interacciones y ofrece valores KD altamente cuantitativos.
ITC mide los valores de KD en el rango milimolar a nanomolar y determina la estequiometría de unión y la termodinámica de unión de la interacción, que también son importantes en la caracterización de las interacciones intermoleculares.,
las ventajas de usar ITC, en comparación con otros ensayos de unión, son:
- Todas las interacciones de unión tienen un cambio de entalpía:el calor se libera o se absorbe
- ITC se puede usar para caracterizar la unión simple 1: 1 y los eventos complejos de unión múltiple.,
- versatilidad-ITC se puede realizar con cualquier muestra, en la mayoría de los buffers entre pH2-12
- No óptico y no espectroscópico
- Sin etiquetado-puede usar moléculas nativas
- En solución – no se necesita inmovilización
- no destructivo-puede recuperar la muestra después del experimento de unión
- Desarrollo de ensayo mínimo
¿por qué debo elegir un producto ITC de Malvern Panalytical?,
El MicroCal PEAQ-ITC es el último calorímetro de titulación isotérmica de Malvern Panalytical y está diseñado para el rendimiento y la calidad, con flujos de trabajo guiados, software de diseño experimental y un módulo de lavado totalmente integrado para datos de alta calidad constante. El MicroCal PEAQ-ITC tiene un volumen de células de 200 µL para un consumo mínimo de muestras preciosas. La célula de reacción se hace con Hastelloy, que es no reactiva y fácil de limpiar. La detección de calor es sensible para la medición experta de valores de KD nanomolares., El PEAQ-ITC viene con un software de análisis de datos robusto, rápido y no subjetivo y se puede automatizar para aumentar la productividad.