o que é afinidade de ligação? afinidade de ligação é a força da interacção de ligação entre uma única biomolécula (por exemplo, proteína ou ADN) e o ligante/ligante (por exemplo, fármaco ou inibidor). Afinidade de ligação é tipicamente medida e relatada pela constante de dissociação de equilíbrio (KD), que é usada para avaliar e classificar as forças das interações bimoleculares. Quanto menor o valor KD, maior a afinidade de ligação do ligante para o seu alvo., Quanto maior o valor KD, mais fraca a molécula-alvo e o ligante são atraídos e ligados um ao outro. a afinidade de ligação é influenciada por interações intermoleculares não covalentes tais como ligações de hidrogénio, interações electrostáticas, forças hidrofóbicas e forças de Van der Waals entre as duas moléculas. Além disso, a afinidade de ligação entre um ligante e a sua molécula alvo pode ser afectada pela presença de outras moléculas.por que devo medir a afinidade de ligação para a minha aplicação?,
Sempre que você estiver caracterização de proteínas, ácidos nucléicos, e qualquer biomolécula, compreender a afinidade de ligação aos substratos, inibidores e cofatores é a chave para a valorização das interações intermoleculares condução de processos biológicos, biologia estrutural e relações estrutura-função.
para a descoberta de drogas, a afinidade de ligação também é medida como a ordem de classificação atinge ligando-se ao alvo e ajudar a projetar drogas que ligam seus alvos seletivamente e especificamente.,existem muitas maneiras de medir a afinidade de ligação e as constantes de dissociação, tais como ELISAs, testes de gel-shift, testes de tracção, diálise de equilíbrio, ultracentrifugação analítica, ressonância de plasma superficial e testes espectroscópicos. que soluções de afinidade de ligação oferecem soluções Panalíticas de Malvern?
Malvern Panalytical oferece Isotérmica de Titulação de Calorimetria (ITC), que é um direto, label-free técnica analítica que mede a afinidade de ligação entre duas moléculas que interagem uns com os outros, como uma proteína e um ligante., ITC mede a mudança de calor associada ao evento de ligação, e é considerado o “padrão-ouro” da análise de Interação, uma vez que permite o estudo de uma ampla gama de interações e fornece valores KD altamente quantitativos.
ITC mede os valores de KD na gama milimolar a nanomolar e determina a estequiometria de ligação e a termodinâmica de ligação da interacção, que também são importantes na caracterização das interacções intermoleculares.,
As vantagens de usar ITC, em comparação com outros ensaios de ligação, são:
- Todas as interacções de ligação têm uma mudança de entalpia – o calor é libertado ou absorvido
- ITC pode ser usado para caracterizar simples 1:1 ligação, e eventos complexos de ligação múltipla.,
- Versatilidade – ITC pode ser realizada com qualquer amostra, na maioria dos buffers entre pH2-12
- Não-ópticos e não-espectroscópicos
- Sem rotulagem, pode usar nativo moléculas
- Na solução – não é necessária a imobilização
- Não-destrutivo – pode recuperar amostra após a ligação de experiência
- Mínimo de ensaio desenvolvimento
Por que eu deveria escolher uma Malvern Panalytical ITC produto?,
o MicroCal PEAQ-ITC é o último calorímetro de titulação isotérmica da Malvern Panalytical e é projetado para desempenho e qualidade, com fluxos de trabalho guiados, software de projeto experimental e um módulo de lavagem totalmente integrado para dados consistentemente de alta qualidade. O MicroCal PEAQ-ITC tem um volume de células de 200 µL para o consumo mínimo de amostras preciosas. A célula de reação é feita com Hastelloy, que é não-reativa e fácil de limpar. A detecção de calor é sensível para a medição pericial dos valores KD nanomolares., O PEAQ-ITC vem com software de análise de dados robusto, rápido e não subjetivo e pode ser automatizado para aumentar a produtividade.