Istoric, noi medicamente au fost descoperite prin screening aleatoriu de ingrediente active din surse naturale și apoi validarea hit-uri pentru activitatea pe modele animale. Screeningul, după cum sugerează și numele, este un proces de cernere pentru a găsi câțiva compuși dintr-un set mare care au o activitate biologică dorită., Premisa de bază a screeningului este că testele biologice sunt reproductibile, fiabile și robuste și relevante din punct de vedere biologic. Enzo oferă o linie de produse și servicii care vă pot accelera programul de descoperire a medicamentelor. Scopul nostru este de a furniza instrumente inovatoare care fac dezvoltarea de droguri mai eficientă, mai rentabilă și mai reușită.
definiția testelor biologice
un test este o procedură de măsurare analitică definită de un set de reactivi care produce un semnal detectabil pentru cuantificarea unui proces biologic., Calitatea unui test este definită de Robustețea și reproductibilitatea semnalului în absența unui compus de testare. Calitatea testului depinde de tipul de semnal măsurat și aceasta ar putea fi absorbanța, fluorescența, luminiscența, radioactivitatea etc. Reactivii, condițiile de reacție, instrumentele de automatizare, precum și modelele statistice pentru analiza datelor joacă, de asemenea, un rol în definirea calității testului. Calitatea analizei și calitatea datelor colectate influențează analiza predictivă a activităților biologice și farmacologice ale unui compus.,
Screening-ul, dezvoltarea testului și validarea
dezvoltarea testului este o metodă obiectivă de screening pentru compușii presupuși pentru a determina interacțiunea sau modificarea țintei. O mai bună înțelegere a căilor specifice implicate în etiologia bolii îi ajută pe cercetători să dezvolte teste mai cuprinzătoare folosind instrumente și tehnologii emergente. În timpul fazei de proiectare, Condițiile și procedurile de testare sunt selectate pentru a minimiza sursele potențiale. Ratele de rezultate fals pozitive și fals negative sunt legate de selectivitatea și sensibilitatea unui test., Un hit este definit ca activitate consecventă a unei molecule într-un test biochimic sau pe bază de celule și este exprimat ca activitate procentuală în raport cu compușii de control. Procesul de dezvoltare și optimizare a testului poate fi gândit ca un ciclu în care pot fi testate mai multe variabile și parametrii care oferă o fereastră de citire mai bună.”Experimentele de optimizare depinde de tehnologia specială utilizată., Un aspect foarte important de optimizare este de a îmbunătăți reproductibilitatea statistice și de performanță a testului de către găsirea de condiții care cresc semnal-zgomot raportul cu privire la controale pozitive și negative, și pentru a reduce inter-ei bine variațiile care apar ca urmare a pipetarea erori și gradienții de temperatură peste placa de microtitrare. În general, coeficientul de variații mai mici de 10% și valorile Z mai mari de 0,5 sunt de dorit. Validarea testului demonstrează că testul este acceptabil pentru scopul propus., Validarea riguroasă este esențială, având în vedere că se așteaptă ca testele să funcționeze robust pe parcursul mai multor ani în timpul dezvoltării preclinice. Un test robust necesită ca semnalul măsurat să fie capabil să furnizeze date relevante din punct de vedere biologic.
dintr-un grup de compuși potențiali, sunt generate câteva piste selectate care demonstrează o relație între structura chimică și activitatea bazată pe țintă într-un test biochimic sau pe bază de celule. Compușii potențiali sunt examinați prin teste de legare, funcționale, biochimice și celulare sau citotoxice., Screening-ul de mare capacitate printr-o bibliotecă mare de compuși poate identifica mai mulți compuși. Trecerea la un compus(compuși) de plumb implică teste celulare, teste toxicologice, surogate biofarmacologice pentru absorbție, distribuție, metabolism și excreție (ADME).
tipuri de teste
testele pot fi fie proceduri fără celule (biochimice), fie bazate pe celule. Alegerea fie a unui test biochimic sau pe bază de celule, împreună cu formatul special de detectare este o chestiune de preferință., Testele pe bază de celule nu numai că obțin potențe de compuși, ci și detectează citotoxicitatea, permeabilitatea și efectele asupra creșterii în același timp, care pot fi văzute ca predictori pentru dezvoltarea târzie. Testele pe bază de celule au reprezentat un succes mai mare în identificarea noilor clase de medicamente în ultimii ani și au devenit astfel mai favorabile. Enzo Life Sciences oferă un portofoliu cuprinzător de produse pentru analiza celulelor vii., Nostru CELLESTIAL® test platforma de fluorescenta pe baza de celule vii teste care sunt sensibile, foarte specifice, și optimizat pentru cele mai solicitante aplicații de imagistică, inclusiv microplăci bazate pe conținut ridicat de screening, citometrie în flux, microscopie confocală, și de câmp larg microscopia de fluorescență în cazul în care coerența și reproductibilitatea sunt esențiale. De asemenea, enzimele sunt ținte importante pentru medicamente, iar medicamentele comercializate funcționează prin inhibarea enzimelor care mediază fenotipurile bolii. Este esențial să avem o înțelegere aprofundată a biochimiei enzimatice și a cineticii acțiunii enzimatice., Experiența noastră de zeci de ani în proiectarea și fabricarea enzimelor active și a substraturilor acestora sprijină dezvoltarea unui portofoliu în continuă expansiune de teste biochimice. Meniul nostru de teste scalabile de activitate enzimatică este ancorat de kiturile noastre de testare MMP și Caspase Drug Discovery.
formate comune de testare și detectare
o varietate de metode de detectare a testelor, cum ar fi colorimetric, fluorescență, bioluminescență și transfer de energie prin rezonanță (FRET) sunt metode de alegere pentru citirea plăcilor., Metodele de fluorescență oferă abordări mai sensibile la screeningul modulatorilor moleculari mici, deoarece au avantajul unui fundal scăzut, pe lângă un semnal mai bun la zgomot. Enzo oferă teste de activitate colorimetrică și fluorometrică de înaltă sensibilitate pentru screening-ul inhibitorilor MMP, caspazei și colagenazei și gelatinazei, precum și enzime foarte active și anticorpi specifici pentru proiectele de descoperire a medicamentelor., Aceste teste exemplifică sinergia capacităților Enzo, asamblarea peptidelor mici, sinteza activă de proteine recombinante, etichetarea fluorescentă și tehnologiile de detectare și dezvoltarea anticorpilor în kituri de testare robuste și reproductibile.
High-throughput screening (HTS) este testarea iterativă a diferiților compuși într-un test. Un ecran este, în general, considerat debit mare dacă poate testa > 10.000 de teste (puțuri) pe zi., HTS permite unui cercetător să efectueze rapid milioane de teste și să identifice rapid genele, proteinele sau compușii modificatori relevanți implicați într-o cale biologică specifică. Rezultatele acestor ecrane identifică de obicei noi ținte de droguri sau activități de droguri la o singură țintă și pot dezvălui relații structură–funcție în „hit-uri” cu molecule mici și clustering funcțional în căile biologice. Enzo Life Sciences are un palmares lung și de succes pentru metode gata de utilizare pentru screening-ul compus printr-o colecție concentrată de biblioteci compuse unice.,
sistemele de screening in vitro și screeningul de înaltă performanță au ajutat foarte mult la îmbunătățirea eficienței screeningului de droguri în procesul modern de descoperire a medicamentelor. Înainte de apariția acestor tehnologii, screening-ul compușilor candidați pentru activitatea biologică a fost un blocaj major în identificarea terapiilor noi.
Figura 1: Enzo ofera o linie de produse care pot accelera descoperirea de droguri program.,progresele în izolarea celulară, generarea liniei celulare și tehnologiile de diferențiere celulară au condus la modele celulare mai scalabile și mai accesibile, care la rândul lor facilitează screeningul folosind modele celulare mai relevante din punct de vedere fiziologic. Datorită naturii sale bogate în informații, screeningul cu conținut ridicat (HCS) a devenit alegerea oamenilor de știință pentru a examina efectele complexe ale compușilor în modele și căi celulare relevante din punct de vedere fiziologic. HCS poate fi utilizat pentru a detecta și monitoriza agregarea proteinelor., Pentru a monitoriza agregarea proteinelor, Enzo Life Sciences a dezvoltat o detectare robustă și cantitativă a agresomilor pentru a accelera studiul bolilor neurodegenerative, bolilor hepatice și toxicologiei. Formulările terapeutice de proteine sunt adesea afectate de probleme cu agregarea proteinelor. Din păcate, monitorizarea și identificarea acestor particule a fost dificilă și se limitează la cromatografia de excludere a mărimii și la electroforeza în gel nativă., În acest studiu, citometria în flux și coloranții specifici agregatelor proteice (PROTEOSTAT®) sau picăturilor de ulei sunt utilizați în combinație pentru a identifica particulele dintr-o formulă terapeutică și pentru a evalua dimensiunea acestor particule.
Figura 2: PROTEOSTAT® Agregarea Proteinelor oferă un nivel superior de detectare a sub-vizibil agregate de proteine în comparație cu convenționale de coloranți.,
Figura 3: Eficient liniare dinamice gama de agregate de anticorpi de detectare folosind PROTEOSTAT® Detectarea Reactiv comparativ cu Thioflavin T. fluorescenței Relative valori unitare (RFUs) poate diferi în funcție de cititor de microplăci utilizate pentru analiza.Enzo oferă o gamă de produse pentru a vă ajuta să monitorizați integritatea produsului și să maximizați randamentul, inclusiv kituri Elisa extrem de sensibile și reproductibile., Kitul nostru de proteine A ELISA este un test imunologic sandwich sensibil și reproductibil pentru a cuantifica reziduurile proteinei A în preparatele de anticorpi monoclonali. Acest kit Elisa validat extensiv permite detectarea eficientă a proteinelor naturale și recombinante a construiește cu recuperare de până la 100%. Kit-ul nostru Elisa de proteine de celule gazdă E. coli sunt ideale pentru analiza impurităților, cuantificarea proteinei celulei gazdă și Western blots.
Figura 4: Proteine O Trusa ELISA recunoaște toate utilizate în mod obișnuit de Proteine O construiește.,
tehnicile de bază enumerate mai sus oferă o imagine de ansamblu a testelor din discovery today. Dar toate oferă avantaje și dezavantaje. Pe măsură ce înțelegerea proceselor biologice care stau la baza bolii avansează, există o nevoie continuă de a dezvolta noi tehnici și teste pentru a ține cont de aceste sisteme din ce în ce mai complexe., De la noastre de lungă durată, pilot ECRAN-PĂI® Compus biblioteca familia de produse de complexul nostru CELLESTIAL® portofoliu de sonde fluorescente și kituri de testare pentru celulare analiză, Enzo Științele Vieții oferă o gamă largă de produse pentru descoperirea de droguri are nevoie. Experiența noastră de zeci de ani în proiectarea și fabricarea enzimelor active și a substraturilor acestora sprijină dezvoltarea unui portofoliu în continuă expansiune de teste biochimice. Vă rugăm să consultați sfaturile noastre de cercetare de succes sau nu ezitați să contactați serviciul nostru de asistență tehnică pentru asistență suplimentară.