Apertura e chiusura del canale del cloruro del regolatore di conduttanza transmembrana della fibrosi cistica (CFTR) sono controllati dal legame ATP e dall’idrolisi dai suoi domini di legame nucleotidico (NBDs). Si presume che questo controlli l’apertura di un singolo “cancello” all’interno del percorso di permeazione, tuttavia, la posizione di tale cancello non è stata descritta., Abbiamo usato patch clamp recording per monitorare l’accesso dei reagenti cytosolic cisteina reattiva a cisteine introdotte in diverse regioni transmembrana (TM) in una forma cisteina-less di CFTR. Il tasso di modifica di Q98C (TM1) e I344C (TM6) sia da metanetiosolfonato (MTSES) e permeante Au(CN)2− ioni è stato ridotto quando la concentrazione di ATP è stata ridotta da 1 mM a 10 µM, e la modifica da MTSES è stata accelerata quando 2 mm pirofosfato è stato applicato per prevenire la chiusura del canale. La modifica di K95C (TM1) e V345C (TM6) non è stata influenzata da queste manovre., Abbiamo anche manipolato gating introducendo le mutazioni K464A (in NBD1) e E1371Q (in NBD2). Il tasso di modifica di Q98C e I344C da entrambi MTSES e Au(CN)2− è stato diminuito di K464A e aumentato di E1371Q, mentre la modifica di K95C e V345C non è stata influenzata. Questi risultati suggeriscono che l’accesso dal citoplasma a K95 e V345 è simile nei canali aperti e chiusi. Al contrario, la modifica del gating del canale ATP-dipendente altera l’accesso a Q98 e I344, situati ulteriormente nel poro., Proponiamo che il gating ATP-dipendente di CFTR sia associato all’apertura e alla chiusura di un cancello all’interno della via di permeazione a livello di questi amminoacidi che rivestono i pori.