Che cos’è l’affinità di legame?
L’affinità di legame è la forza dell’interazione di legame tra una singola biomolecola (ad esempio proteina o DNA) al suo partner legante / legante (ad esempio farmaco o inibitore). L’affinità di legame è tipicamente misurata e riportata dalla costante di dissociazione di equilibrio (KD), che viene utilizzata per valutare e classificare le forze dell’ordine delle interazioni bimolecolari. Più piccolo è il valore KD, maggiore è l’affinità di legame del ligando per il suo bersaglio., Maggiore è il valore di KD, più debolmente la molecola bersaglio e ligando sono attratti e si legano l’uno all’altro.
L’affinità di legame è influenzata da interazioni intermolecolari non covalenti come il legame dell’idrogeno, le interazioni elettrostatiche, le forze idrofobiche e di Van der Waals tra le due molecole. Inoltre, l’affinità di legame tra un ligando e la sua molecola bersaglio può essere influenzata dalla presenza di altre molecole.
Perché dovrei misurare l’affinità di legame per la mia applicazione?,
Ogni volta che si caratterizzano proteine, acidi nucleici e qualsiasi biomolecola, comprendere l’affinità di legame con substrati, inibitori e cofattori è la chiave per l’apprezzamento delle interazioni intermolecolari che guidano i processi biologici, la biologia strutturale e le relazioni struttura-funzione.
Per la scoperta di farmaci, l’affinità di legame viene misurata anche per classificare i colpi di ordine che si legano al bersaglio e aiutano a progettare farmaci che legano i loro obiettivi in modo selettivo e specifico.,
Esistono molti modi per misurare l’affinità di legame e le costanti di dissociazione, come ELISA, saggi di gel-shift, saggi di pull-down, dialisi di equilibrio, ultracentrifugazione analitica, risonanza plasmonica di superficie e saggi spettroscopici.
Quali soluzioni di affinità vincolante offrono Malvern Panalytical?
Malvern Panalytical offre la calorimetria isotermica di titolazione (ITC), che è una tecnica analitica diretta e priva di etichette che misura l’affinità di legame tra due molecole che interagiscono tra loro, come una proteina e un ligando., ITC misura il cambiamento di calore associato all’evento di legame ed è considerato il “Gold Standard” dell’analisi delle interazioni in quanto consente lo studio di un’ampia gamma di interazioni e fornisce valori KD altamente quantitativi.
ITC misura i valori di KD nell’intervallo da millimolare a nanomolare e determina la stechiometria di legame e la termodinamica di legame dell’interazione, che sono anche importanti nella caratterizzazione delle interazioni intermolecolari.,
I vantaggi dell’utilizzo di ITC, rispetto ad altri saggi di legame, sono:
- Tutte le interazioni di legame hanno un cambiamento di entalpia – il calore viene rilasciato o assorbito
- ITC può essere utilizzato per caratterizzare il semplice legame 1:1 e complessi eventi di legame multipli.,
- Versatilità – ITC può essere eseguita con qualsiasi campioni, nella maggior parte dei buffer tra pH2-12
- Non ottico e non spettroscopiche
- Nessuna etichettatura – è possibile utilizzare nativo molecole
- In soluzione di immobilizzazione necessaria
- Non distruttiva, in grado di recuperare campione dopo il legame esperimento
- Minimo sviluppo di analisi
Perché dovrei scegliere un Malvern Panalytical ITC prodotto?,
MicroCal PEAQ-ITC è il più recente calorimetro di titolazione isotermica di Malvern Panalytical ed è progettato per prestazioni e qualità, con flussi di lavoro guidati, software di progettazione sperimentale e un modulo di lavaggio completamente integrato per dati di alta qualità. MicroCal PEAQ-ITC ha un volume di cellule di 200 µL per un consumo minimo di campioni preziosi. La cellula di reazione è fatta con Hastelloy, che è non reattivo e facile da pulire. La rilevazione del calore è sensibile per la misura esperta dei valori nanomolari di KD., PEAQ-ITC è dotato di un software di analisi dei dati robusto, rapido e non soggettivo e può essere automatizzato per aumentare la produttività.