historiquement, de nouveaux médicaments ont été découverts grâce au criblage aléatoire d’ingrédients actifs provenant de sources naturelles, puis à la validation des résultats d’activité dans des modèles animaux. Le criblage, comme son nom l’indique, est un processus de tamisage pour trouver les quelques composés d’un grand ensemble qui ont une activité biologique souhaitée., Le principe de base du criblage est que les tests biologiques sont reproductibles, fiables, robustes et biologiquement pertinents. Enzo propose une gamme de produits et de services qui peuvent accélérer votre programme de découverte de médicaments. Notre objectif est de fournir des outils innovants qui rendent le développement de médicaments plus efficace, plus rentable et plus réussi.

définition des essais biologiques

un essai est une procédure de mesure analytique définie par un ensemble de réactifs qui produit un signal détectable pour quantifier un processus biologique., La qualité d’un test est définie par la robustesse et la reproductibilité du signal en l’absence d’un composé de test. La qualité du test dépend du type de signal mesuré, qui peut être l’absorbance, la fluorescence, la luminescence, la radioactivité, etc. Les réactifs, les conditions de réaction, l’instrumentation d’automatisation, ainsi que les modèles statistiques pour l’analyse des données jouent également un rôle dans la définition de la qualité du dosage. La qualité du dosage et la qualité des données collectées influencent l’analyse prédictive des activités biologiques et pharmacologiques d’un composé.,

criblage, développement des essais et Validation

le développement des essais est une méthode objective de criblage des composés putatifs pour déterminer l’interaction ou la modification de la cible. Une meilleure compréhension des voies spécifiques impliquées dans l’étiologie de la maladie aide les chercheurs à développer des tests plus complets à l’aide d’outils et de technologies émergents. Au cours de la phase de conception, les conditions et les procédures d’analyse sont sélectionnées pour minimiser les sources potentielles. Les taux de faux positifs et de faux négatifs sont liés à la sélectivité et à la sensibilité d’un test., Un hit est défini comme une activité cohérente d’une molécule dans un dosage biochimique ou cellulaire et est exprimé en pourcentage d’activité par rapport aux composés témoins. Le processus de développement et d’optimisation des tests peut être considéré comme un cycle dans lequel plusieurs variables peuvent être testées et les paramètres qui donnent une meilleure « fenêtre de lecture. »Les expériences d’optimisation dépendent de la technologie particulière utilisée., Un aspect très important de l’optimisation est d’améliorer la reproductibilité et la performance statistique du test en trouvant des conditions qui augmentent le rapport signal sur bruit par rapport aux contrôles positifs et négatifs, et de diminuer les variations entre puits qui se produisent en raison des erreurs de pipetage et des gradients de température à travers la plaque de microtitre. En général, des coefficients de variation inférieurs à 10% et des valeurs Z supérieures à 0,5 sont souhaitables. La validation de l’essai démontre que l’essai est acceptable aux fins prévues., Une validation rigoureuse est essentielle étant donné que les essais sont censés fonctionner de manière robuste sur plusieurs années au cours du développement préclinique. Un test robuste exige que le signal mesuré soit capable de fournir des données biologiquement pertinentes.

À partir d’un pool de composés potentiels, quelques pistes sélectionnées qui démontrent une relation entre la structure chimique et l’activité basée sur la cible dans un test biochimique ou cellulaire sont générées. Les composés potentiels sont criblés par des essais de liaison, fonctionnels, biochimiques et cellulaires ou de cytotoxicité., Le criblage à haut débit à travers une grande bibliothèque de composés peut identifier plusieurs composés. La progression vers un ou des composés principaux implique des tests cellulaires, des tests toxicologiques, des substituts biopharmacologiques pour l’absorption, la distribution, le métabolisme et l’excrétion (ADME).

Types de tests

les tests peuvent être des procédures sans cellules (biochimiques) ou à base de cellules. Le choix d’un dosage biochimique ou cellulaire ainsi que le format de détection particulier est une question de préférence., Les tests cellulaires permettent non seulement d’obtenir la puissance des composés, mais aussi de détecter en même temps la cytotoxicité, la perméabilité et les effets sur la croissance, ce qui peut être considéré comme des prédicteurs du développement tardif. Les tests à base de cellules ont permis de mieux identifier de nouvelles classes de médicaments au cours des dernières années et sont donc devenus plus favorables. Enzo Life Sciences propose une gamme complète de Produits pour L’analyse de cellules vivantes., Notre plate-forme D’analyse CELLESTIAL® propose des tests de cellules vivantes à base de fluorescence qui sont sensibles, hautement spécifiques et optimisés pour les applications d’imagerie les plus exigeantes, y compris le criblage à haute teneur à base de microplaques, la cytométrie en flux, la microscopie confocale et la microscopie à fluorescence à large champ où la cohérence et De même, les enzymes sont des cibles médicamenteuses importantes et les médicaments commercialisés fonctionnent par inhibition des enzymes médiant les phénotypes de la maladie. Il est essentiel d’avoir une compréhension approfondie de la biochimie enzymatique et de la cinétique de l’action enzymatique., Nos décennies d’expérience dans la conception et la fabrication d’enzymes actives et de leurs substrats soutiennent le développement d’un portefeuille de tests biochimiques en constante expansion. Notre menu de tests d’activité enzymatique évolutifs est ancré par nos kits D’analyse MMP et Caspase Drug Discovery.

formats de dosage courants et Détection

une variété de méthodes de détection de dosage, telles que la colorimétrie, la fluorescence, la bioluminescence et le transfert d’énergie de résonance (FRET) sont des méthodes de choix pour les lectures de plaques., Les méthodes de Fluorescence fournissent des approches plus sensibles au criblage de petits modulateurs moléculaires car elles ont l’avantage d’un faible fond en plus d’un meilleur signal sur bruit. Enzo propose des tests d’activité colorimétrique et fluorométrique de haute sensibilité pour le dépistage des inhibiteurs de MMP, de caspase et de collagénase et de gélatinase ainsi que des enzymes hautement actives et des anticorps spécifiques pour les projets de découverte de médicaments., Ces tests illustrent la synergie des capacités d’Enzo, l’assemblage de petits peptides, la synthèse de protéines recombinantes actives, les technologies de marquage et de détection fluorescentes et le développement d’anticorps en kits d’analyse robustes et reproductibles.

Le criblage à haut débit (HTS) est l’essai itératif de différents composés dans un essai. Un écran est généralement considéré comme un débit élevé s’il peut analyser > 10 000 analyses (puits) par jour., HTS permet à un chercheur d’effectuer rapidement des millions de tests et d’identifier rapidement des gènes modificateurs pertinents, des protéines ou des composés impliqués dans une voie biologique spécifique. Les résultats de ces tests identifient généralement de nouvelles cibles de médicaments ou de nouvelles activités de médicaments sur une seule cible et peuvent révéler les relations structure–fonction dans les « hits” de petites molécules et le regroupement fonctionnel dans les voies biologiques. Enzo Life Sciences a une longue et fructueuse expérience en matière de méthodes prêtes à l’emploi pour le criblage de composés grâce à une collection ciblée de bibliothèques de composés uniques.,
les systèmes de criblage In vitro et le criblage à haut débit ont grandement contribué à améliorer l’efficacité du criblage de médicaments dans le processus moderne de découverte de médicaments. Avant l’avènement de ces technologies, le criblage de composés candidats pour l’activité biologique constituait un goulot d’étranglement majeur dans l’identification de nouveaux traitements.

Les avancées dans les technologies d’isolement cellulaire, de génération de lignées cellulaires et de différenciation cellulaire ont conduit à des modèles cellulaires plus évolutifs et abordables, qui à leur tour facilitent le dépistage en utilisant des modèles cellulaires plus pertinents sur le plan physiologique. En raison de sa nature riche en Informations, le criblage à haute teneur (HCS) est devenu le choix des scientifiques pour examiner les effets complexes des composés dans des modèles et des voies cellulaires physiologiquement pertinents. HCS peut être utilisé pour détecter et surveiller l’agrégation des protéines., Pour surveiller l’agrégation des protéines, Enzo Life Sciences a développé une détection quantitative robuste des aggresomes afin d’accélérer l’étude des maladies neurodégénératives, hépatiques et toxicologiques. Les formulations protéiques thérapeutiques sont souvent en proie à des problèmes d’agrégation des protéines. Malheureusement, la surveillance et l’identification de ces particules ont été difficiles et se limitent à la chromatographie à exclusion de taille et à l’électrophorèse sur gel natif., Dans cette étude, la cytométrie en flux et les colorants spécifiques aux agrégats de protéines (PROTEOSTAT®) ou aux gouttelettes d’huile sont utilisés en combinaison pour identifier les particules dans une formulation thérapeutique et évaluer la taille de ces particules.

Enzo propose une gamme de produits pour vous aider à surveiller l’intégrité du produit et à maximiser le rendement, y compris des kits ELISA hautement sensibles et reproductibles., Notre kit Protein A ELISA est un immunoessai sandwich sensible et reproductible pour quantifier les résidus de protéine a dans les préparations d’anticorps monoclonaux. Ce kit ELISA largement validé permet une détection efficace des constructions naturelles et recombinantes de la protéine A avec une récupération allant jusqu’à 100%. Notre kit ELISA de protéine de cellule hôte D’E. coli sont idéaux pour l’analyse d’impureté, la quantification de protéine de cellule hôte, et les taches occidentales.

Les techniques de base énumérées ci-dessus fournissent un aperçu des essais dans discovery aujourd’hui. Mais tous offrent des avantages et des inconvénients. À mesure que notre compréhension des processus biologiques sous-jacents à la maladie progresse, il est nécessaire de développer de nouvelles techniques et de nouveaux tests pour tenir compte de ces systèmes de plus en plus complexes., De notre gamme de Produits Phare SCREEN-WELL® Compound library de longue date à notre portefeuille complexe CELLESTIAL® de sondes fluorescentes et de kits de dosage pour l’analyse cellulaire, Enzo Life Sciences fournit une grande variété de produits pour vos besoins de découverte de médicaments. Nos décennies d’expérience dans la conception et la fabrication d’enzymes actives et de leurs substrats soutiennent le développement d’un portefeuille de tests biochimiques en constante expansion. Veuillez consulter nos conseils de recherche réussis ou n’hésitez pas à contacter notre service D’assistance technique pour obtenir de l’aide.