el efecto del extracto de Gynostemma pentaphyllum en fibroblastos dérmicos de ratón

resumen

fondo. El objetivo de este trabajo es demostrar el efecto del extracto de Gynostemma pentaphyllum sobre los fibroblastos dérmicos de ratón. Estudios recientes han demostrado que esta planta puede poseer grandes propiedades antioxidantes, lo que puede ser muy beneficioso en la lucha contra el estrés oxidativo. Método. Se preparó extracto de Gynostemma pentaphyllum y se obtuvieron y cultivaron fibroblastos dérmicos de ratón según nuestros protocolos de laboratorio., Se cultivaron doce muestras de células en las mismas condiciones y se establecieron controles tanto negativos como positivos. La inducción del estrés oxidativo se llevó a cabo con luz ultravioleta C (UVC). Se realizó un recuento de células viables mediante microscopía. El análisis de los resultados globales se procesó utilizando el programa SPSS versión 16.0. Resultado. El análisis estadístico mostró una fuerte correlación positiva entre la concentración de Gynostemma pentaphyllum y la duración media de la viabilidad celular (rs = 1), con un alto nivel de significación estadística ()., Asimismo, existió una fuerte correlación positiva entre los ensayos de viabilidad celular (rs = 0.988–1), con significación estadística (). Conclusion. El extracto de Gynostemma pentaphyllum prolonga la viabilidad de los fibroblastos dérmicos de ratón dañados por el estrés oxidativo inducido por la luz UVC. Los resultados muestran los beneficios potenciales de este extracto en el envejecimiento de las células dérmicas.

1. Introducción

El retraso y el control del envejecimiento cutáneo constituyen uno de los mayores retos a los que se enfrentan los investigadores y científicos en el área de la cosmetología., Esta área de estudio se investiga continuamente, debido a la búsqueda interminable de mantenimiento de la juventud y la apariencia. Muchas investigaciones científicas están actualmente en curso, a medida que el campo del desarrollo cosmecéutico se amplía. Nuevos estudios están revelando la verdad sobre muchos agentes que modifican el proceso de envejecimiento de la piel. La futura incorporación de estos estudios a la práctica clínica cambiaría la forma en que actualmente se gestiona este proceso.

muchos extractos de plantas juegan un papel vital en la modificación del envejecimiento de la piel., Algunos de estos han sido investigados a fondo, mientras que otros solo se han utilizado empíricamente durante siglos. Gynostemma pentaphyllum, comúnmente conocido como «Jiaogulan» en China, es uno de los muchos ejemplos de estas plantas .

esta planta se cultiva normalmente en las regiones montañosas de China y se considera una vid debido a su patrón de crecimiento. Se ha utilizado durante siglos como un remedio tradicional para afecciones respiratorias y tóxicas y también se ha asociado con la longevidad, entre otros beneficios .,

Se han realizado muchos estudios para verificar algunas de las muchas creencias asociadas con el uso de esta hierba; sin embargo, según la extensa investigación realizada antes de esta propuesta, no se han documentado ni publicado estudios sobre la acción del extracto de la planta en los fibroblastos dérmicos.

el objetivo de este trabajo es estudiar los efectos del extracto de Gynostemma pentaphyllum sobre los fibroblastos dérmicos, en lo que se refiere al envejecimiento de la piel. La hipótesis de este estudio se dirige a favor de este extracto vegetal, por ser un contribuyente significativo al proceso de retardo del envejecimiento de la piel., Este estudio tiene una gran importancia científica y contribuirá aún más a la comprensión completa de los beneficios de esta hierba. Este artículo abre la posibilidad para el desarrollo de productos cosmecéuticos con base científica, diseñados para combatir los signos del envejecimiento de la piel.

2. Materiales y métodos

(1) Preparación de extracto de Gynostemma pentaphyllum: se calentaron 100 mL de agua destilada doble hasta el punto de ebullición (100°C). Se maceraron 100 mg de la hierba Gynostemma pentaphyllum y se añadieron al agua destilada doble en el punto de ebullición., La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente. La solución se esterilizó con filtros de 0,22 micrómetros, se selló y posteriormente se almacenó en un 4C en un refrigerador. Una variedad de diferentes concentraciones del extracto se obtuvieron posteriormente de la solución original.(2) los fibroblastos dérmicos de ratón se obtuvieron y cultivaron según los protocolos establecidos por nuestro laboratorio del Departamento de Dermatología del Hospital General de la Universidad Médica de Tianjin. Doce muestras de células fueron cultivadas en las mismas condiciones., Una de las doce muestras se utilizó como control positivo y se mantuvo en condiciones óptimas durante todo el experimento, sin exposición a agresiones ni estimulantes.(3) las otras once muestras se colocaron bajo luz ultravioleta C (UVC) de 8 vatios a una distancia de 50 cm Para inducir estrés oxidativo. La inducción del estrés oxidativo se limitó a 1,5 horas.(4) posteriormente, una de las once muestras se colocó en condiciones óptimas durante el resto del experimento, sin más exposición a agresiones o estimulantes. Esta muestra fue considerada como el control negativo.,(5) las diez muestras restantes se expusieron a cantidades similares de diferentes concentraciones del extracto de Gynostemma pentaphyllum y, al igual que con el resto de las muestras, se etiquetaron correctamente y se colocaron en condiciones óptimas durante el resto del experimento, sin ninguna exposición adicional a agresiones o estimulantes.(6) el análisis cualitativo de la viabilidad celular se llevó a cabo mediante microscopía, según nuestros estándares de laboratorio, a cero horas, seguido de intervalos posteriores.(7) todo el procedimiento se repitió oficialmente dos veces, para un total de tres juicios.,(8) los resultados obtenidos a partir de las observaciones periódicas se documentaron de forma cuidadosa y precisa.(9) el análisis de los resultados globales se procesó utilizando el programa SPSS versión 16.0. Se utilizó el coeficiente de correlación de Spearman para demostrar la relación entre las variables utilizadas.(10) los resultados se presentaron mediante gráficos y tablas.

3. Resultados

la luz UVC indujo un nivel máximo de estrés oxidativo a las 1,5 horas de exposición (Ver Tabla 1 y Figura 1). Después de este período, Los signos de apoptosis fueron claramente visibles (ver figuras 4, 5, 6 y 7)., El análisis cualitativo de la viabilidad celular reveló que una concentración óptima de Gynostemma pentaphyllum (tomada como 4,5 mg/mL) prolongaba significativamente la viabilidad de las células expuestas a la luz UVC (Ver Tabla 2 y figuras 2 y 3). El análisis estadístico mostró una fuerte correlación positiva entre la concentración de Gynostemma pentaphyllum y la duración media de la viabilidad celular (rs = 1) con un alto nivel de significación estadística () (Ver Tabla 3(a)). Asimismo, existió una fuerte correlación positiva entre los ensayos de viabilidad celular (rs = 0.988–1) con significación estadística () (Ver Tabla 3(b)).,

Figure 1

Relationship between cell viability and exposure to UVC light. For qualitative analysis of cell viability: 4—all cells viable; 3—more viable cells than apoptotic cells; 2—more apoptotic cells than viable cells; 1—total apoptosis.

Figure 2

Relationship between cell samples and the duration of cell life., For qualitative analysis of cell viability: 4—all cells viable; 3—more viable cells than apoptotic cells; 2—more apoptotic cells than viable cells; 1—total apoptosis.

Figure 3

Relationship between cell viability and exposure to Gynostemma pentaphyllum following UVC light-induced oxidative stress.,

Figure 4

Photographs of various stages of the investigation (magnification 40x, no stain used). All cells viable.

Figure 5

Photographs of various stages of the investigation (magnification 40x, no stain used). More viable cells than apoptotic cells.,

Figure 6

Photographs of various stages of the investigation (magnification 40x, no stain used). More apoptotic cells than viable cells.

Figure 7

Photographs of various stages of the investigation (magnification 40x, no stain used). Total apoptosis.

4., Discusión

Gynostemma pentaphyllum pertenece a la familia de las cucurbitáceas y se ha asociado con el tratamiento del cáncer, úlceras gástricas, hepatitis, enfermedades respiratorias e hiperlipidemia, entre otras patologías. Uno de los beneficios más recientemente descubiertos de esta hierba son sus propiedades antioxidantes .

los mecanismos exactos involucrados en la fisiopatología del envejecimiento cutáneo indican que el estrés oxidativo juega un papel vital en el progreso de este proceso., Cualquier medida que se pueda tomar para suprimir la producción de radicales libres facilitará la preservación de la juventud de la piel. Después de una investigación exhaustiva sobre algunos de los antioxidantes naturales, Gynostemma pentaphyllum parece ser uno de los más prometedores. Nuestros resultados indican que Gynostemma pentaphyllum es eficaz para prolongar la vida de los fibroblastos dérmicos de ratón y que este efecto aumenta de manera dosis-dependiente.

Se han realizado muchos estudios para afirmar el potencial de Gynostemma pentaphyllum como antioxidante., Las células utilizadas en la mayoría de los estudios varían ampliamente, pero todos los resultados son estadísticamente significativos. La acción de este extracto de planta sobre los fibroblastos dérmicos no ha sido investigada, según la investigación y revisión realizada. Actualmente No hay estudios disponibles para verificar el efecto de este extracto en los fibroblastos dérmicos.

Schild et al. demostró la acción protectora del extracto de Gynostemma pentaphyllum en cortes cerebrales privados de oxígeno y glucosa. Esta privación llevó a la aparición de lesiones celulares debido al estrés oxidativo., Los resultados mostraron que el uso de este extracto, dentro de las 48 horas de cultivo de las células, aumentó los niveles de proteína y actividad de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa de manganeso (mn-SOD) y glutatión peroxidasa (GPx). En consecuencia, la concentración de peróxido de hidrógeno celular (H2O2) se mantuvo en un nivel bajo. Efectos antioxidantes similares han sido descritos en los hallazgos del estudio realizado por Zhang et al., que afirmó las propiedades antioxidantes del extracto de Gynostemma pentaphyllum en las células cerebrales ., Del mismo modo, se han obtenido resultados favorables significativos por diferentes investigadores que también investigaron el efecto antioxidante protector de Gynostemma pentaphyllum en las células cerebrales . Nuestros resultados son consistentes con los de los autores mencionados anteriormente, y estos resultados validan la efectividad de este extracto en el combate del estrés oxidativo.

Müller et al. además contribuyó a estudios sobre el potencial antioxidante de este extracto de hierba. El estudio se realizó con hepatocitos expuestos a sustancias que inducen estrés oxidativo., El extracto protegió completamente las células de la apoptosis inducida por el estrés oxidativo. Resultados similares han sido obtenidos por Lin et al. en su investigación utilizando hepatocitos .

otros estudios realizados, utilizando fagocitos y células endoteliales, como el de Li et al. han producido resultados significativos . El hecho de que la acción de este extracto no sea específica creó la base para continuar nuestra investigación. Nuestros resultados ahora revelan que este extracto es eficaz para prolongar la vida de los fibroblastos dérmicos de ratón expuestos al estrés oxidativo inducido por la luz UVC.,

La investigación realizada por Ma y Yang, en la Escuela de Posgrado de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Beijing, demostró que Gynostemma pentaphyllum podría eliminar los radicales libres activos de oxígeno de manera efectiva . Zhu et al. demostrado en su estudio, utilizando radiación UV, que Gynostemma pentaphyllum no solo es un eliminador de radicales libres, sino que también posee la función biológica de anti-irradiación .

otras ventajas de Gynostemma pentaphyllum han sido descubiertas por otros investigadores. Gauhar et al. investigó el efecto del extracto de Gynostemma pentaphyllum sobre la obesidad., Este estudio se realizó a nivel preclínico y ha demostrado resultados significativos. El mecanismo molecular de acción implicó la estimulación de la oxidación de grasa y la captación de glucosa a través de la activación de AMPK en células Miotubos L6, con una disminución correspondiente en el aumento de peso corporal, peso del hígado y niveles de colesterol en sangre en ratones .

En resumen, nuestro estudio muestra que Gynostemma pentaphyllum es capaz de reducir los efectos del estrés oxidativo en los fibroblastos dérmicos de ratón. El estrés oxidativo acelera el envejecimiento y la apoptosis., En nuestro estudio, la prolongación de la viabilidad celular tras el estrés oxidativo inducido por UV sirvió como parámetro para inferir que el extracto de Gynostemma pentaphyllum actuaba como antioxidante. Este extracto puede reducir significativamente los efectos del estrés oxidativo en los fibroblastos dérmicos humanos y también puede reducir el envejecimiento y la apoptosis de estas células. Se realizó una evaluación cualitativa de la viabilidad de fibroblastos dérmicos de ratón tras la exposición a UVC, en presencia y ausencia de extracto de Gynostemma pentaphyllum, como fase inicial de nuestra investigación en curso., Dado que no se disponía de resultados iniciales publicados sobre este tema, comenzamos nuestra investigación con un estudio cualitativo in vitro. Dado que nuestros resultados son prometedores, nuestro equipo procedería a realizar un estudio preclínico cuantitativo para corroborar nuestros resultados iniciales. Se requiere más investigación e investigación sobre este tema, con el fin de obtener más información sobre el mecanismo real de acción del extracto en las células dérmicas. Nuestro estudio también sirve como base sobre la cual se pueden desarrollar nuevos productos cosmecéuticos, como cremas y lociones antienvejecimiento y antioxidantes.

5., Conclusión

nuestro estudio revela que el extracto de Gynostemma pentaphyllum tiene un efecto positivo en la viabilidad de los fibroblastos dérmicos de ratón que han sido dañados por el estrés oxidativo inducido por la luz UVC. Hay un nivel muy alto de asociación entre el uso de Gynostemma pentaphyllum y la prolongación de la vida celular. Las repercusiones potenciales de tal investigación son claramente visibles, ya que esta investigación crea una base para estudios adicionales en este campo de la dermatología., Además, se requiere una investigación más profunda sobre este tema en particular para establecer comparaciones válidas entre los resultados obtenidos y aislar los compuestos reales que son responsables de proteger las células.

Conflicto de Intereses

Los autores declaran que no existe conflicto de intereses con respecto a la publicación de este documento.,

agradecimientos

Los autores de esta investigación desean reconocer y extender su sincera gratitud al Departamento de Dermatología y al laboratorio de Dermatología del Hospital General de la Universidad Médica de Tianjin, por proporcionar los materiales necesarios, la financiación y el apoyo a lo largo de esta investigación.

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